Sinopsis: Ezio Auditore continúa las aventuras que concluyó en Assassin’s Creed 2, pero esta vez en Roma, el último reducto de los Templarios en la Italia Renacentista. Tendremos que acudir a la Ciudad Eterna y conquistar poco a poco sus zonas, rehabilitándolas y convirtiéndolas en territorio de los asesinos. También tendremos que cumplir misiones de asesinato para acabar con los secuaces de los Borgia, hasta enfrentarnos a nuestro peor enemigo, César Borgia. Para ello contaremos con la ayuda de Leonardo Da Vinci y Maquiavelo, entre otros, y con un grupo de asesinos, nuestra Hermandad, que nos ayudarán en las misiones.